A.折叠成立体结构具有酶的活性
B. 能够选择性的自我复制
C. 能够合成双链DNA
D. 使蛋白质磷酸化
E. 利用四联体密码子编码遗传信息
当Hfr的细菌染色体进入F-后,在一个短时间内,对细胞中某些位点来说,是一段二倍体的DNA。这样的细菌称为部分二倍体或部分合子,其中来自供体的DNA称外基因子,受体染色体则称为内基因子。
你纯化了与这种效应有关的蛋白,显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍,面对-50缺失的模板无激活作用,印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合,虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的,但当TFⅡD存在时,它可与结合位点稳定地结合。
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:
表Q25.1 10个克隆的序列
注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。