DNA分子用EcoRI消化可得如图16-3-6所示的限制酶图谱(数字代表自分子左端起每个切点的相对距离)。在某次实验
DNA分子用EcoRI消化可得如图16-3-6所示的限制酶图谱(数字代表自分子左端起每个切点的相对距离)。在某次实验中(将消化的样品加热至65℃),凝胶电泳图谱中不是呈现预期的5条带,而是另一种情况,试作解释。
DNA分子用EcoRI消化可得如图16-3-6所示的限制酶图谱(数字代表自分子左端起每个切点的相对距离)。在某次实验中(将消化的样品加热至65℃),凝胶电泳图谱中不是呈现预期的5条带,而是另一种情况,试作解释。
质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点:EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性;在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形,在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
表16-2-11 | |
酶混合物 | 片段长度(kb) |
EcoRI EcoRI,BamHI EcoRI,HpaI EcoRI,SalI EcoRI,BglII EcoRI,PstI PstI,BglII BglII,HpaI | 5.7 0.4,5.3 0.5,5.2 0.7,5.0 1.1,4.6 2.4,3.3 1.3,4.4 0.6,5.1 |
质粒pBR607DNA是双链环状的,分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因,它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位:EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
表16-2-10 | |
酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
EcoRI,PstI EcoRl,BamHI EcoRI,HindⅢ EcoRI,SalI EcoRI,BamHI,PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
两份几乎相同的DNA样品(例如从突变型和野生型病毒X得到的DNA分子)混合、变性、再退火,可得如图2-3-24所示的同源双链和异源双链。同源双链含来自同一份DNA样品的两条链,而异源双链则含来自两份不同DNA样品的链。两份DNA样品的顺序差异导致了异源双链中因不能形成氢键配对而保持单链状态的非互补区域。若这些区域长度大于50至100个核苷酸;则在电镜下呈环状。图B显示两种常见的异源双链结构。异源双链DNA的检测对于大片段缺失、碱基添加以及取代的定位是很有效的方法。试利用图中的数据构建一个野生型DNA的图谱,算出突变型中片段缺失的位置。
用EcoRI酶解具有单个EcoRI位点的Tet-r质粒。将样品退火,用DNA连接酶处理,然后进行CaCl2转化实验。挑选Tet-r菌落。从这些菌落中分离出质粒DNA,进行凝胶电泳,结果发现有两类菌落:一类菌落在原来质粒的预期位置处出现一条带;另一类菌落则得到一条移动慢得多的带。这条移动慢的带可能是何物?(用BglI酶处理Kan-rAmp-r质粒会破坏amp基因)
用一种限制性内切核酸酶消化某大型的环状质粒DNA。得到的片段随机重装配(即片段不再按原来顺序排列),选择与原来质粒分子量相同的环状分子。然后用由这些片段组成的分子感染不含质粒的宿主细胞。
你纯化出经BamHI消化重组质粒DNA所得的两个DNA片段,其中一个长为400bp,另一个长900bp,你想要如图16-3-20(1)所示将它们连接起来产生一个杂合基因,如果你的推测是正确的话,就会得到令人惊奇的新物质。
你在DNA连接酶存在情况下将两种片段混合在一起并且进行孵育,30分钟后和8小时后,你取一些样品进行琼脂糖凝胶电泳分析,你惊讶地发现连接得到了一系列复杂的DNA片段而不是所需的1.3kb小片段,并且发现孵育时间越长,小片段浓度越低而大片段浓度增加,如果你用BamHI切割连接后的重组体,你会重新获得开始的两片段(图16-3-20(2)A)。
令人吃惊的是,你将从琼脂糖凝胶中纯化得到的1.3kb片段用BamHI消化,检查它的结构,与预想的一样,可以得到最初的两片段(图16-3-20(2)B)。这就可以确定这是你所需的结构。但是,你用EcoRl消化另一份样品,你希望通过消化得到300bp的片段和700bp的片段,但你跑的电泳是一系列DNA片段(图16-3-20(2)B)。
噬菌体中DNA分子具有短的互补的单链末端,当它感染细菌时该分子环化。图16-3-7的A和B分别显示用Bam限制酶处理游离的DNA分子后得到的限制酶图谱和凝胶电泳条带。从受感染的细胞中分离出DNA进行特性研究。在某些条件下酶解后的片段经电泳后结果如图16-3-7C所示。试问在这些条件下DNA呈怎样的结构?
爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。
如图12.3.4所示电路中,已知uS=24+3cosωt,非线性电阻伏安特性为u=2i2(i>0)。用小信号分析法可得电压u=______。