图Q23.2所示是从基因组DNA文库中分离的一段DNA,其中有一编码基因(黑框),图中给出了几种限制性内切核酸酶的
图Q23.2所示是从基因组DNA文库中分离的一段DNA,其中有一编码基因(黑框),图中给出了几种限制性内切核酸酶的作用位点。该图同时给出了用作表达该基因的表达载体,弯曲箭头是启动子的转录方向,并给出了几种酶的作用部位。
图Q23.2基因组DNA和表达载体图谱
请根据此图,回答下列问题:
图Q23.2所示是从基因组DNA文库中分离的一段DNA,其中有一编码基因(黑框),图中给出了几种限制性内切核酸酶的作用位点。该图同时给出了用作表达该基因的表达载体,弯曲箭头是启动子的转录方向,并给出了几种酶的作用部位。
图Q23.2基因组DNA和表达载体图谱
请根据此图,回答下列问题:
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
图13-3-5所示的是一段基因组DNA的限制酶图谱以及与其对应的cDNA限制酶谱图。这段基因组DNA中有多少个内含子?它们在哪里?
限制酶简写:B:BamHI;C:ClaI;H:HindⅢ;R:EcoRI;S:SalI;AAA:poly(A)尾。
假定你获得了一病毒的dsDNA,并全部进行了克隆,并用有限的几种酶对该病毒基因组DNA进行了酶切分析(图Q25.11),图中所示数字的单位是kb。
图Q25.11 假设的某病毒基因组DNA的限制性酶切图谱