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[多选题]
Southern杂交常用的转膜方法有()。
A.毛细管虹吸印迹法
B.真空转移法
C.DNA直接点膜法
D.电转移法
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下列哪一个不是Southern杂交的步骤？（）
A.用限制酶消化DNA
B.DNA与载体的连接
C.用凝胶电泳分离DNA片段
D.DNA片段转移至硝酸纤维素膜上
E.用一个标记的探针与膜杂交
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：
1.jpg)
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：
2.jpg)
画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：
3.jpg)
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
A.用限制酶消化DNA。
B.把DNA连接入一个载体。
C.在胶上分离DNA片段
D.把DNA片段转移到硝酸纤维素膜上。
E.膜与标记的探针杂交。
A.限制性核酸内切酶切消化目的DNA并通过琼脂糖凝胶电泳分离
B.DNA在原位变性、中和
C.将DNA从凝胶中转移到尼龙膜上
D.与标记好的探针杂交
E.洗膜及放射自显影
