经过测序分析，欲克隆的一段DNA序列如下（只列出单链部分)： GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGG

第1题

12．经过测序分析，欲克隆的一段DNA序列如下（只列出单链部分)： GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACAT

12．经过测序分析，欲克隆的一段DNA序列如下(只列出单链部分)：

GAATTCCGGCGGCGGGGTTTTCATTATTATGATCGTTGACATGGGACAAGGGGCTCCTATAATAGGTGC

ATTTGTAGGGGATGTGGCCACATGATAGCGCGTCGAGGCATTCAGGACCGATATYGTCATATTGCCAGC

ATGCTGCAGCGCGCCAACTTAGTTACAACITATACGATGAHTiAAAAAAAGAATATCAAATAGCCATCC

ACCCGAAAGACCACCGCAAGTATCGGTACGATCGTACCAGCACACACCACAGTCGCCAGTCTGTTACCA

AATAATAAAGTTGATAATTAATTCACATCTACCTGGGTAACCCAGGTAGATGTGAAbHTiAGAATTC

这段序列被克隆到某多拷贝质粒的一个EcoR I限制性位点，并表达了一个小肽，请找出这段序列中所含有的以下几个功能位点：

(1)两个EcoR I位点；

(2)一个启动子；

(3)一个转录起始位点；

(4)一个转录终止子；

(5)一个核糖体结合位点；

(6)一个翻译起始密码子；

(7)一个翻译终止子。

另请标出相应的调控序列及编码区的氨基酸。

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第2题

你测序了酵母的一段DNA，并推测含有一个野生型的基因。作为研究策略，你需要获得该基因的突变表型，你如何用克

隆得到的野生型的基因去获得突变型？

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第3题

从酵母中克隆到一段DNA序列具有类似原核生物DNA复制起始点的功能，即______。 A．USR（Upstream Replicating S

从酵母中克隆到一段DNA序列具有类似原核生物DNA复制起始点的功能，即______。

A．USR(Upstream Replicating Sequence) B．LTR(Long Terminal Sequence)

C．ARS(Autonomously Replicating Sequence)D．ORF(Open Reading Frame)

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第4题

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对其功

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

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第5题

你在研究一个癌基因，其编码一个转录因子，在细菌中表达时，基因产生的蛋白完全不可溶，无法直接检验其功能，尽

管你可以获得该蛋白的很好抗体。免疫染色显示，该蛋白定位于核内。如果能判定它结合什么样的DNA序列，就能通过在有关已知基因启动子天然位点的现存序列库中找到它调控的基因。

你的导师建议你用PCR来扩增该蛋白结合的少量存在的DNA分子。她的主意如图16-3-38，①合成一些26核苷酸长的随机寡核苷酸链，两边以确定的25核苷酸序列作为PCR扩增的引物位点(图16-3-38(A))；②把这些寡核苷酸加到含转录因子的细胞粗提物中，转录因子能结合到带结合位点的寡聚物上；③用该因子的抗体分离出结合到该因子上的寡核苷酸链；④PCR扩增出该核苷酸链，并分析其顺序。

你用0.2ng的单链随机序列寡聚物开始实验，用PCR引物中的一个把它转变为双链DNA。在图16-3-38(B)中，四轮选择和扩增后，用BamHI和EcoRI处理分离的DNA，把片段克隆到质粒上，并给十个不同的克隆测序(表16-3-38)。

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第6题

克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用，它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成

特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列，包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如，极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接，如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。

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第7题

来自E.coli的一个编码蛋白的基因的中间一段DNA片段序列如下所示： 5'-C C G G C T A A G C C A T G A C

来自E.coli的一个编码蛋白的基因的中间一段DNA片段序列如下所示：

5'-C C G G C T A A G C C A T G A C T A G C-3'

3'-G G C C G A T T C G G T A C T G A T C G-5'

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第8题

一段病毒双链DNA片段中的一条链序列如下，该双链DNA片段编码称为vir-1和vir-2的两种肽。将这段双链DNA片段加

入到体外转录和翻译体系中可以产生10残基肽(vir-1)和5残基肽(vir-2)。

AGATCGGATGCTCAACTATATGTGATTAACAGAGCATGCGGCATAAACT

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第9题

人类基因组的前期研究工作主要是进行基因组的序列测定。然而，有人根据人类基因组是由重复序列组成

为由，认为反复对同一种DNA进行测序是不明智的。你能否拟定两份计划，一份计划应保证仅仅单一序列DNA被测序，第二个计划应允许仅仅转录的单一DNA序列被测序。请简述你的两份计划。

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第10题

细菌中的终止密码子是由两种蛋白质中的一种解读的。释放因子1（RF1)识别UAG和UAA，而RF2则识别UGA和UAA编码RF1

细菌中的终止密码子是由两种蛋白质中的一种解读的。释放因子1(RF1)识别UAG和UAA，而RF2则识别UGA和UAA编码RF1和RF2的基因已被克隆和测序。比较了编码RF2的基因核苷酸序列与蛋白质的氨基酸排列顺序后，有一惊人的发现，如图Q11.4中基因图谱所示，终止密码包含在基因序列之中。为排除干扰，基因和蛋白质的序列已经过仔细的检查。请问：

图Q11.4 RF2基因图

粗线表示编码序列，开始和结束处的序列作为参照

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第11题

人类基因组DNA经过Sau3A（G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上（G↓GATCC)。BamHⅠ位于

人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：

假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：

画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：

其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。

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