一个等链段长度的等效自由结合链如图1-5所示,若链上一点C到两端点A,B的距离分别为和。证明。(符号<—>为
一个等链段长度的等效自由结合链如图1-5所示,若链上一点C到两端点A,B的距离分别为和。证明。(符号<—>为统计平均值)
一个等链段长度的等效自由结合链如图1-5所示,若链上一点C到两端点A,B的距离分别为和。证明。(符号<—>为统计平均值)
下列三种不同的高分子链,其等效链长的大小顺序为( )>( )>( )。
(a) 实际的高分子链 (b) 自由结合链 (c) 自由旋转链
A.双链经常断裂的位置,在这个位置依次引导了重组。
B.单链经常断裂的位置,这个位置导致了单链的同化作用。
C.使双链断裂的RecBCD复合体切割3'-自由末端的位点。
D.一些能允许产生其3'-自由末端的单链的顺式作用元件。
E.RecA蛋白的DNA结合位点,从这个位点开始,RecA蛋白沿着DNA搜索,直到遇到一个断裂点。
噬菌体T4编码一个对重组和DNA复制很重要的单链DNA结合蛋白(SSB蛋白)。含有编码SSB蛋白温度敏感型基因的噬菌体T4突变体在升高温度时会快速地终止重组和DNA复制。噬菌体T4 SSB蛋白是分子质量为35 000Da的单体蛋白,它和单链而不是双链DNA紧密结合,结合体中DNA与蛋白质的重量比为1:12。然而SSB蛋白和DNA的结合显示出一个很特别的性质,如图Q13.4所示。当单链DNA过量时(10μg),而SSB蛋白为0.5μg时则完全检测不到结合体[图Q13.4(a)],然而当SSB蛋白为7.0μg时,可以看见许多二者的结合体[图Q13.4(b)]。
图Q13.4噬菌体T4 SSB蛋白与单链DNA的结合通过蔗糖梯度离心分析,发现DNA较蛋白质重得多,沉得快,因此更靠近梯度的底部
两份几乎相同的DNA样品(例如从突变型和野生型病毒X得到的DNA分子)混合、变性、再退火,可得如图2-3-24所示的同源双链和异源双链。同源双链含来自同一份DNA样品的两条链,而异源双链则含来自两份不同DNA样品的链。两份DNA样品的顺序差异导致了异源双链中因不能形成氢键配对而保持单链状态的非互补区域。若这些区域长度大于50至100个核苷酸;则在电镜下呈环状。图B显示两种常见的异源双链结构。异源双链DNA的检测对于大片段缺失、碱基添加以及取代的定位是很有效的方法。试利用图中的数据构建一个野生型DNA的图谱,算出突变型中片段缺失的位置。
链段长度增加表明聚合物的刚性______、均方末端距______、应力松弛______、蠕变______、流动性______、Tf______、Tg______、Tm______。
大肠杆菌的dnaB基因编码一个在复制叉上可将DNA解折叠的解旋酶(DnaB)。已利用如图Q2.5所示的人工底物对它的特性进行了研究。实验方法是在多种条件下培养底物,然后把样品进行琼脂糖凝胶电泳。如果短单链DNA与长的DNA已退火结合在一起,那么泳动速率就会快些,但如果它已解折叠且已变性,则泳动速率就会慢些。把短链进行放射性标记就可选择性地跟踪它的迁移,然后用放射自显影检查它的位置。图Q2.6所示为几个实验的结果,底物1没有尾巴的杂交体,不被DnaB解折叠(图Q2.6,第1泳道、第2泳道);但是有尾的底物和DnaB、ATP在37℃下温育同样能释放出大量解折叠的小片段(第6泳道、第10泳道)。对于底物3,只有3'部分片段是解折叠的(第10泳道),所有的解折叠产物都绝对依赖于ATP的水解。加DNA单链结合蛋白(SSB)可在一定程度上加强这种解折叠(比较一下第5泳道、第9泳道与第10泳道)。有趣的是,SSB必须在DnaB加后3min加入,否则会抑制解折叠。
图Q2.5用来检测DnaB的底物
图Q2.6几个检测DnaB解折叠实验的结果,只有单链片段被放射性标记,它们各自的位置已在图中标明