为了保证重组DNA分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用rec-r-m-表型的细胞株作为受体菌。
为了保证重组DNA分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用rec-r-m-表型的细胞株作为受体菌。
为了保证重组DNA分子在受体细胞中能够稳定地独立存在下来,通常用rec-r-m-表型的细胞株作为受体菌。
A.基因载体的选择与构建
B.目的基因与载体的连接
C.重组DNA分子导入受体细胞
D.筛选并克隆含重组体的受体细胞
E.表达目的基因编码的蛋白质
A.基因载体的选择与构建
B.外源基因与载体的拼接
C.重组DNA分子导入受体细胞
D.筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞
E.表达目的基因编码的蛋白质
在非照射细胞中,如果RNA合成被利福平(RNA聚合酶的抑制物)阻止,复制中的DNA分子能够完成复制,但是第二轮复制不能起始。受紫外线强烈照射的细胞是否也是这样的情况?
A.获得目的基因-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
B.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
C.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-扩增目的基因-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-目的基因表达
D.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达-重组DNA
普通原核阻遏子对特异DNA结合顺序和非特异DNA顺序的亲和力差104~106倍,每细胞有10个阻遏子分子就足以保证高水平阻遏。推测带有同样特异性的阻遏子在人细胞中的情况:多少拷贝的阻遏子分子才能达到原核细胞的阻遏水平(提示,大肠杆菌的基因组含4.7×106bp,人的单倍体基因组有2.4×109bp)。
放射性同位素自杀技术(Suicidetechnique)常被用来筛选突变体:先将细胞放在高比放射性的[H3]-胸腺嘧啶培养基中,然后将细胞冷冻保存以使得某些放射性同位素发生衰变。DNA分子中的dTMP的衰变可导致DNA链的断裂和其它潜在的致死性事件。于是那些DNA参入[H3]-dTMP的细胞极有可能被杀死。(1)一定能够在这种培养基下生存的细胞会是哪一个酶有缺陷。(2)选择核苷酸代谢中的任何一种酶,设计一种自杀程序以筛选你选中的目的酶缺陷的细胞突变株。
A.RecA蛋白依赖于ATP的蛋白水解酶活性。
B.RuvAB解旋酶复合体依赖于ATP的蛋白水解酶活性。
C.RecBCD蛋白复合体的活性。
D.由于卷曲而引起的DNA分子上的张力。
E.侵入链和受体链之间随意的碱基配对。
在重组过程中,DNA双链分子在同源性或者非同源性位点相互作用(连接),从而形成一个Holliday结构。在两张可供评估的显微照片中,有一张照片上Holliday连接体突出臂的长度是相等的,对比之下,在另外一个Holliday结构中所有的臂都是不同长度,分析哪张显微照片是同源性重组的结果,结果表明在缺口位点将产生(Patch)小块重组体和拼接重组体。
你正在研究大脑切片中cAMP水平的控制机理,并已证实信号分子如异丙基肾上腺素通过与β-肾上腺素受体的作用,引起cAMP适度增长,这同G-蛋白介导的受体与腺苷酸环化酶间的耦联作用所预期的结果一样。问题在于:异丙基肾上腺素与许多药理试剂间有协同作用,而这些药理试剂本身对cAMP水平元影响,甚至会降低。如何解释这种cAMP水平的反常增加呢?
一位生化学家向你提供了一个可能的解释:他发现在体外实验中,抑制性的三聚G-蛋白的β、γ亚基会刺激Ⅱ型腺苷酸环化酶在脑中的表达。为了验证细胞中的这一发现,计划表达人肾细胞中的cDNAs。而人肾细胞中缺乏在脑中发现的受体。通过这种方式,重现你在大脑切片中观察到的令人迷惑的结果。但在一更简单的背景中,你用Ⅱ型腺苷酸环化酶、多巴胺受体(可与抑制性的G-蛋白相互作用)和αs亚基的各种cDNAs的组合转染肾细胞,得到的细胞在有和无quinpirole存在时分别测量cAMP的含量(quinpirole可激活多巴胺受体),结果见图14-3-11,当然也可检测百日咳菌外毒素的影响。百日咳菌外毒素通过修饰α1亚基而阻塞了从G-耦联受体传来的信号,而α1亚基经修饰后不能再与GTP结合,从βγ亚基上解离下来。