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更多“设计一个实验确定一克隆基因在体外进行转录时RNA链延伸的平均…”相关的问题
A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交，定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段，确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析，推测其功能
一个遗传学家想克隆脉孢菌的cys－1基因(已知该基因在5号染色体着丝粒附近)，该区域附近有两个RFLP标记(RFLPl和RFLP2)，他作了以下杂交。 cys－1(O型)×cys－1+(M型) 检验了100个子囊孢子的RFLP和cys－1基因型，结果如下：
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(1)cys－1在染色体的这个区域吗？ (2)如果是，画出cys－1基因在该区域的染色体图，标出图距。 (3)下一步怎样克隆cys－1基因？
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：
表Q25.1 10个克隆的序列
注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。
下列家系中，某常染色体显性遗传病基因被认为在4号染色体上，所以针对5个4号染色体上的RFLP标记(1～5)在每个成员中作了检验。结果如下图，不同上标代表RFLP基因座的不同等位基因。
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(1)说明怎样进行该实验？ (2)确定哪个RFLP基因座最接近致病基因，并说出你的理由。 (3)你怎样用这种信息克隆该疾病基因？
