线状噬菌体DNA分子与除中央10%缺失外其余完全相同的分子杂交。
A.在电镜下看到的该异源双链呈何结构?
B.若所缺失的10%片段被一段长度相同的非同源细菌DNA取代,该异源双链的结构如何?若以上非同源细菌DNA的长度仅为缺失的噬菌体DNA长度之半,则结构有何变化?
温和噬菌体P4的DNA是线状双链分子,长11.54kb,具粘性末端。用Bam限制酶完全酶解得到长度为6.4、4.1、1.0kb的片段。用Bam部分酶解得到长度为10.5、7.4、6.4、4.1和1.0kb的片段。用DNA连接酶获得的环状P4DNA可以用Bam酶解得到长度为6.4和5.1kb的片段。
噬菌体T4编码一个对重组和DNA复制很重要的单链DNA结合蛋白(SSB蛋白)。含有编码SSB蛋白温度敏感型基因的噬菌体T4突变体在升高温度时会快速地终止重组和DNA复制。噬菌体T4 SSB蛋白是分子质量为35 000Da的单体蛋白,它和单链而不是双链DNA紧密结合,结合体中DNA与蛋白质的重量比为1:12。然而SSB蛋白和DNA的结合显示出一个很特别的性质,如图Q13.4所示。当单链DNA过量时(10μg),而SSB蛋白为0.5μg时则完全检测不到结合体[图Q13.4(a)],然而当SSB蛋白为7.0μg时,可以看见许多二者的结合体[图Q13.4(b)]。
图Q13.4噬菌体T4 SSB蛋白与单链DNA的结合通过蔗糖梯度离心分析,发现DNA较蛋白质重得多,沉得快,因此更靠近梯度的底部
假定某种噬菌体颗粒含有小的线性单链DNA分子。通过CsCl离心研究它的复制方式。在CsCl中,它的密度是1.714g/cm3。含14C标记DNA的噬菌体感染生长在含3H的培养液中的细菌。于不同时间里取样,分离出DNA,对各样品进行离心。所得结果示于图6-3-42。试问这种噬菌体怎样复制它的DNA?你认为子代噬菌体会不会有14C标记?
核酸酶S1能在双链DNA分子中将不配对的两碱基打断,如果从美国实验室分离到一种品系的λ噬菌体DNA分子与从法国实验室分离到的假定基因型是同一品系的λ噬菌体DNA分子杂交,接近一半的杂交DNA分子被S1酶切开,请解释。
已知一个基因型为ade+arg+cys+his+leu+pro+的菌株对一种新发现的噬菌体溶源,但不知道前噬菌体的位点。该细菌的图谱为:
用该溶源菌作为噬菌体的来源,然后将该噬菌体加到一基因型为ade- arg- cys- his-leu-pro-的菌株中。经短时间保温后,将细菌样品涂布在6种含下表所示的不同的添加物的培养基上。结果如下:
(1)本实验中的遗传机制是什么? (2)前噬菌体的插入位点在哪儿?
①35S不会出现在子代噬菌体中。
②32P总是出现在几个子代的噬菌体中,但是每个噬菌体中的含量比亲代噬菌体颗粒中的含量少得多。35S不出现在噬菌体颗粒中。
③32P只出现在一或二代的噬菌体颗粒中,并只出现在一条DNA链上。35S出现在许多子代在噬菌体中,每个噬菌体的含量比亲代噬菌体颗粒中的含量少得多。
T4噬菌体能编码一种与单链DNA结合的蛋白(即SSB蛋白)。SSB蛋白对于重组和DNA的复制相当重要,编码SSB蛋白的基因部位产生的温度敏感突变T4突变体在温度升高时,能迅速地停止重组和DNA复制。T4的SSB蛋白是一个分子量为35000U的伸长的单体蛋白,它能紧密结合单链DNA,而不能结合双链DNA。在DNA与蛋白质量达到1:12时结合达到饱和。然而,图12-3-16表明,SSB蛋白结合DNA有一个特殊的性质。在10μg过量单链DNA存在下,有0.5μgSSB蛋白质时实际上没有结合,而在7.0μgSSB蛋白质存在时,可观察到几乎所有定量的结合。