DNA中的碱基对数 | 不配对的百分数 |
5000 1000 250 | 0.28 1.40 5.60 |
A.基于单个片段的互补使其形成反向平行的双螺旋。
B.取决于A—U的含量。因为形成的氢键越少,形成碱基对所需能量就越少。
C.只有当两个配对的片段中所有的碱基互补时才发生。
D.也包括不规则的碱基对如G-U。
E.只要碱基配对所必需的全部自由能是正数,则允许几个不配对的碱基的参入。
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高,平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链,\表示切割位点)。这个位点有一个优点,即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱,请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小,以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段,以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢?
A.基于各个片段间的互补,形成反向平行双螺旋
B.依赖于A-U含量,因为形成的氢键越少则发生碱基配对所需的能量也越少
C.仅仅当两配对区段中所有的碱基均互补时才会发生
D.同样包括有像G-U这样的不规则碱基配对
E.允许存在几个只有提供过量的自由能才能形成碱基对的碱基
用Maxam-Gilbert法测定单链DNA分子的核苷酸顺序。一份DNA样品进行四种不同处理。
(1)DNA与硫酸二甲酯反应,该试剂使G和A都甲基化.但与G的反应快5倍。然后加热DNA,这样可除去甲基化的G和A残基。然后加碱,这时与甲基化碱基相连的糖从两侧的磷酸二酯键上断裂下来。
(2)如第1步中用硫酸二甲酯处理后将DNA放入稀酸溶液;这种处理使A优先脱落。在碱性条件下DNA的磷酸二酯键断裂。
(3)DNA与肼反应,再用吡啶处理。和第1和第2步的结果一样,磷酸二酯键发生断裂,但在T和C部位断裂频率相同。
(4)在2mol/LNaCl中进行第3步处理;这样可防止T处的断裂。这几步反应控制在每50个碱基中有一个发生甲基化或肼解反应。进行彻底水解反应。每组反应混合物由一组片段组成,它们的长度由特定碱基的位置决定。聚丙烯酰胺凝胶电泳可将每组混合物中的片段根据长度进行分离。通常DNA末端用32P标记,这样凝胶中的片段可以用放射自显影定位。根据每个位置上带的密度可以从凝胶上读出顺序。须注意的是带的位置可确定碱基的部位,但是带的密度与断裂的几率有关。图2-3-49显示某样品的有关图谱。