3.转录的起始位点(stp)决定在模板链上嘧啶核苷酸的位置,在此形成第一个杂合的RNA和DNA碱基对。
A.阻断聚合酶在操纵子上的经过位点
B.形成茎环结构阻断聚合酶的通过
C.物理阻断聚合酶分子上的DNA结合位点
D.通过结合聚合酶分子,从而阻止其结合
烷化鸟嘌呤的糖苷键不稳定,容易脱落形成DNA链上的无碱基位点,复制时可以插入任何核苷酸,造成DNA序列改变。( )
导致嗜睡症的微生物锥虫,能改变其表面糖蛋白壳,从而避开宿主的免疫性防御。你现正在研究可变的表面糖蛋白(VSG)的合成,已把编码基因定位于某个染色体的近端粒处。然而你还未能将启动子定位,实验表明它可能与VSG基因相距几千个核苷酸。一个老朋友建议你利用紫外线辐射来给启动子定位,他曾经成功地用这项技术定位腺病毒转录单元。因为RNA聚合酶转录时不能通过嘧啶二聚体(紫外线辐射造成的损伤),转录过程对紫外线的敏感性可用来测定转录起始点与转录区间的距离。由于没有其他方法可选,于是你决定试一试。
你采用核糖体RNA基因的转录来检验系统。5SRNA转录单位略多于100个核苷酸,而18S、5.8S和28S和28SRNA是一个8kb长转录单元的一部分。将锥虫置于逐渐增强的紫外线照射下,分离出核,与32P-dNTP温育。接着从核中分离出RNA,将之与5SRNA和核糖体转录单元和部分克隆出的DNA杂交。以每个位点上数目的对数对紫外剂量作图,得到一条直线,直线的斜率与杂交探针距启动子的距离成比例。用来自VSG基因开始区域的探针重复这个实验,发现对VSG基因和核糖体转录单元的探针4而言,前者转录被抑制的速度较后者快7倍。
图Q7.1 SV40早期启动子序列
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:
表Q25.1 10个克隆的序列
注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。
A、30S亚基的蛋白
B、30S亚基的16SrRNA
C、50S亚基的23SrRNA
D、50S亚基的蛋白