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第2题
克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用，它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成
特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列，包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如，极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接，如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。
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第6题
你在一种高效的克隆载体λYES（酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库，这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库，这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成，它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分，这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳，包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效，一旦进入E.coli，在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制，这就使cDNA在质粒上与λ分离，这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大，载体和cDNA均用特殊的方法加以制备，在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育，一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接，这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成，其5'-末端均有磷酸基团，然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效，用2μg载体和0.1mg cDNA，你可以得到4×107重组分子组成的文库。
第7题
质粒扩增时加入氯霉素的目的A．利用抗药性标记进行筛选B．抑制大肠杆菌蛋白质合成，提高质粒拷贝数C
质粒扩增时加入氯霉素的目的
A．利用抗药性标记进行筛选
B．抑制大肠杆菌蛋白质合成，提高质粒拷贝数
C．抑制杂菌污染
D．抑制阴性克隆
E．以上都不是
第8题
不是所有松弛型质粒都需要进行扩增的，如pBS、pUC载体系统就不必进行氯霉素扩增，这是因为这些质粒的拷贝数很高，达到( )。
A.30～50
B. 100～200
C. 300～400
D. 500～700
第9题
克隆载体宿主是外源基因能够在细胞中大量扩增和表达的基本要素。宿主细胞非常重要的特性是不具有______，不能
降解导入的未经修饰的外源DNA；不具有______，使克隆载体DNA与宿主染色体DNA之间不发生同源重组。目前最常用的原核克隆宿主是______，真核克隆宿主是______。
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