多标记的二倍体酵母可用来研究基因转化。在减数分裂中,正常的相互交换(同源性重组),将产生2:2的比率分离等位的标记,而没有相互交换或基因转化的将在减数分裂后改变这个分离率为3:1。试通过对异源双链结构位点(A+a'和A'+a)的定位来讨论下列给定序列,并以限制性作为等位的标记对分离进行讨论。
A5'-GCGCATTACTCGAATTCTACGACGTCTAT-3'
A'3'-CGCGTAATGAGCTTAAGATGCTGCAGATA-5'
a5'-GCGCATTACTCGATTACTACGACGTCTAT-3'
a'3'-CGCGTAATGAGCTAATGATGCTGCAGATA-5'
图Q13.2亲代与重组的双螺旋
根据图12-3-14(A),画出图12-3-14(B)中所示的同源序列的交换重组产物,在图中,用一条线代表了DNA双链,用箭头代表了同源重组的目的基因。
在高pH(11.3至11.6,因DNA而异)下,dsDNA转变为ssDNA。若DNA含5-溴尿嘧啶(Bu),则临界pH约为10.5。这种转换可由CsCl离心来检测,因为当DNA转变为单链时,其密度增加0.014g/cm3。正常DNA和Bu-DNA也可在CsCl中加以区分,因为后者密度高于前者密度约0.1g/cm3。过去曾认为,大肠杆菌DNA是四链的,由两条双螺旋通过“biunial键”互相连接。这样,Meselson和Stahl观察所得的杂种密度DNA被认为是一个LL双链与一个HH双链结合而成。为得到杂种DNA,将大肠杆菌在含5-溴尿嘧啶的培养基中培养一代,Robert Baldwin和Eric Shooter就能区别BuLDNA和BuBu:LLDNA(即含BuBu和LL的四链DNA)。试作BuL和BuBu:LL这两种DNA的密度pH的曲线。
两份几乎相同的DNA样品(例如从突变型和野生型病毒X得到的DNA分子)混合、变性、再退火,可得如图2-3-24所示的同源双链和异源双链。同源双链含来自同一份DNA样品的两条链,而异源双链则含来自两份不同DNA样品的链。两份DNA样品的顺序差异导致了异源双链中因不能形成氢键配对而保持单链状态的非互补区域。若这些区域长度大于50至100个核苷酸;则在电镜下呈环状。图B显示两种常见的异源双链结构。异源双链DNA的检测对于大片段缺失、碱基添加以及取代的定位是很有效的方法。试利用图中的数据构建一个野生型DNA的图谱,算出突变型中片段缺失的位置。
A.第二代
B.第三代
C.第四代
D.第六代
图12-3-18中表示出了两个同源的亲本双链和可能存在的两种重组产物在能产生所示重组产物的亲本双链间画出的连接体(Holliday junction)。连接体的每条链的左端标明是5'-末端还是3'-末端,以清楚地显示亲本双链与重组体双链之间的关系。写出每种类型的重组产物产生时需要切开哪些链。最后,请画出经过一次复制后的重组体。