A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交,定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段,确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析,推测其功能
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
A.获得目的基因-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
B.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
C.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-扩增目的基因-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-目的基因表达
D.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达-重组DNA
下列限制酶哪个或哪些可以准确切割下一段cDNA?这段cDNA可以编码多肽KIGPACF(N代表任一种核苷酸)。
限制酶 识别序列
AluI AGCT
Sau96I GGNCC
HindⅢ AAGCTT
A.人类基因组中长约200-600bp的单拷贝片段
B.人类基因组中2—6bp呈串联重复的DNA序列
C.人类基因组小长约150—400bp的cDNA文库表达序列
D.两顺序相同的互补序列在同一条DNA链上相反方向排列构成反倒位重复
E.两顺序相同的互补序列在同一条DNA链上相同方向排列构成倒位重复