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[主观题]

转录因子SP1结合GGGcGG序列。下图所示为SV40早期启动子中含有的六个这样的“GC”盒。限制酶NdeI和SmaI的切割位

点已显示出。若已有了DNA片段和纯化的SPl，试叙述用DNaseI将SPl结合位点定位在SV40早期启动子上的详细步骤，注意要讲述原材料是如何被标记的以及各种必需的对照。画一个凝胶图显示你的结果(标记每个泳道)。如何利用这些信息、推出哪些位点与SPl有最高的亲和性？

转录因子SP1结合GGGcGG序列。下图所示为SV40早期启动子中含有的六个这样的“GC”盒。限制酶

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第1题

转录因子SP1结合的序列是GGCGGG。图Q7.1是SV40早期启动子序列，其中有6个用下画线标出的“GC”框。限制酶Nde和Sm

a Ⅰ的酶切位点也表示出来。请从该DNA片段和纯化的SP1开始，详细描述如何用DNase Ⅰ定位出SP1在SV40早期启动子上的结合位点。请注意说明起始物质是如何被标记的，以及所有必要的控制步骤。如何利用这一信息揭示哪个位点对SP1的亲和性最高？

图Q7.1 SV40早期启动子序列

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第2题

转录因子可以与被核小体结合的DNA序列结合吗？

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第3题

myc是一类核内癌基因家族，是一种核蛋白转录因子，能与特异DNA序列结合。（)

myc是一类核内癌基因家族，是一种核蛋白转录因子，能与特异DNA序列结合。( )

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第4题

甾类受体转录因子______。

A.都结合于同一激素

B.不以特异性序列模式结合DNA

C.通过同一序列结合锌，不同于通过锌指结合Zn的方式

D.通过第二指C端的氨基酸进行二聚化

E.有不同的区域分别用于激活转录、结合DNA和结合激素

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第5题

为什么一些基因在它们的转录因子存在时并不总是处于活性状态？下列解释正确的是（)。A．转录因子

为什么一些基因在它们的转录因子存在时并不总是处于活性状态？下列解释正确的是()。

A．转录因子结合位点的邻近序列

B．有其他蛋白的结合

C．转录因子结合位点的染色质结构状态

D．缺少共激活蛋白

E．以上都是

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第6题

3．σ因子的结合依靠( )。

A.对启动子共有序列的长度和间隔的识别

B.与核心酶的相互作用

C.弥补启动子与共有序列部分偏差的反式作用因子的存在

D.转录单位的长度

E.翻译起始密码子的距离

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第7题

一个癌基因，从序列上看似乎编码一个转录因子。当放在细胞中表达时，该基因的产物是完全不溶的，这影响了对其功

能的直接检测。免疫染色表明，这种蛋白质定位于细胞核内，如同推测的一样，是一种转录因子。如果能够测出它所结合的DNA序列，就可以从现有的序列资料中查找已知基因启动子的天然位点，从而能够找到它所调节的基因。

有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA，思路是(图Q25.8)：①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体，在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)]；②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中，转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合；③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸；④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。

图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸，N代表任何一种核苷酸；EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路，用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验，这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链，经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后，用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA，将片段克隆到质粒中，并测定了10个独立的克隆(表Q25.1)，问：

表Q25.1 10个克隆的序列

注：画线的序列是PCR引物部位，两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始，所有序列中结合位点的方向都是相同的。

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第8题

你已经建立了一个体外转录系统。使用一个已知的DNA片段，它可在一个病毒启动子的控制下被转录。当在系统中加入

纯化的RNApolⅡ、TFⅡD(TATA结合因子)和TFⅡB、TFⅡE(与RNA聚合酶结合)后，DNA开始被转录。然而，体外转录系统的低效率暗示可能有一个额外的调控序列与转录因子结合，而这种转录因子在纯化的组合当中并不存在，为了寻找与这个被推测的调控因子结合的DNA序列。你做了一系列在转录起始点上游的缺失(如图13-3-44B所示)，比较它们在纯化系统中及在细胞粗提物中的转录活性。作为内部控制，你将每种缺失体与一个能产生生长转录本的未缺失的模板混合(如图13-3-44A)。这些分析的结果(图13-3-44C)显示，一直缺失到-61，对转录仍无影响，而-11的缺失在两种系统中都会使转录受到抑制。使人惊奇的是一50位的缺失体可以像未损失的模板一样在纯化系统内进行有效的转录。但是在细胞粗提物中却没有这种作用。

你纯化了与这种效应有关的蛋白，显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍，面对-50缺失的模板无激活作用，印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合，虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的，但当TFⅡD存在时，它可与结合位点稳定地结合。