图Q25.10 10kb片段二种酶切图谱
A.同聚尾法连接效率高,且易回收插入的片段
B.不匹配的黏性末端可通过部分填补后连接
C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性,将有利于重组连接
D.平末端连接时,在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率
E.Mg2+/ATP是T4DNA连接酶反应时的必要因素
逆转病毒的整合酶:
A.是位点专一的内切酶。
B.作为外切酶作用在LTR上。
C.在靶DNA上产生错开的切割。
用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序,将5'-末端用32P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应),再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下,片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱,回答下列问题:
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。