A.现象
B.协同性
C.反应
D.个体性
虽然在失活的X染色体上绝大多数基因都被关闭,但仍有一部分具有活性,你认为可能存在导致X染色体失活,X相关基因表达机制的线索,为了验证这一想法,分离了人X染色体上大量的cDNA,并且用Northern blot检测它们的表达。比较了来自正常男性和女性X染色体基因在细胞内的表达、来自非正常人员的X染色体在细胞内的表达和来自啮齿类一人杂交细胞系X染色体基因的表达,这种细胞系保留了一个无活性的人X染色体(X)或一个有活性的人的X染色体(X)。在cDNA中发现有三种形式的表达,如图16-3-27所示cDNA的A、B、C的表达形式。
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
有一个30个碱基对的双链DNA片段,且含lac操纵基因顺序,把它插入到质粒中去。把该质粒引入到基因型为i+z+y+的大肠杆菌菌株。一旦构建成功,在每个细胞中就有30个拷贝的质粒。