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[主观题]
DNA的复制开始于特殊的______，______向或______向进行。原核生物的DNA和真核生物细胞器的DNA是______；真核生
物染色体DNA是______。
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T4噬菌体能编码一种与单链DNA结合的蛋白(即SSB蛋白)。SSB蛋白对于重组和DNA的复制相当重要，编码SSB蛋白的基因部位产生的温度敏感突变T4突变体在温度升高时，能迅速地停止重组和DNA复制。T4的SSB蛋白是一个分子量为35000U的伸长的单体蛋白，它能紧密结合单链DNA，而不能结合双链DNA。在DNA与蛋白质量达到1:12时结合达到饱和。然而，图12-3-16表明，SSB蛋白结合DNA有一个特殊的性质。在10μg过量单链DNA存在下，有0.5μgSSB蛋白质时实际上没有结合，而在7.0μgSSB蛋白质存在时，可观察到几乎所有定量的结合。
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库，这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成，它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分，这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳，包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效，一旦进入E.coli，在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制，这就使cDNA在质粒上与λ分离，这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大，载体和cDNA均用特殊的方法加以制备，在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育，一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接，这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成，其5'-末端均有磷酸基团，然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效，用2μg载体和0.1mg cDNA，你可以得到4×107重组分子组成的文库。
