以EcoR Ⅰ分别酶切载体和片段DNA,重新连接前要进行下列哪些操作( )
A.65℃处理5~10分钟,使EcoR Ⅰ失活
B.CIP处理载体DNA,防止自身环化
C.琼脂糖凝胶电泳检测
D.A+B+C
E.A+C
A.65℃处理5~10分钟,使EcoR Ⅰ失活
B.CIP处理载体DNA,防止自身环化
C.琼脂糖凝胶电泳检测
D.A+B+C
E.A+C
某双链DNA,以32P标记5’端,然后分别用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切,得到下列长短的片段(单位为kb),*表示带标记片段。 EcoRⅠ:2.8、4.6、6.2 *、7.4、8.0 * BamHⅠ:6.0 *、10.0 *、1 3.0 如果不带标记的DNA用两种酶同时切割,会得到下列片段:1.0,2.0,2.8,3.6,6.0,6.2,7.4。 两种酶的酶切图谱是什么?
某DNA片段含有4个EcoRⅠ酶切位点:
上述DNA片段存在若干突变体,这些突变体用同种酶完全酶切,电泳后结果如图所示,其中*代表带有标记的片段。可否确定发生了何种突变?
(1)EcoRⅠ到HindⅢ位点间的片段有多大? (2)画出HhaⅠ和Sau3A的酶切位点。 (3)标记有32p的同样DNA片段,用HhaⅠ完全酶切,进行电泳,那么用EB染色或放射自显影,会分别得到什么样的图?
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
从原位杂交结果知道,5个含有基因组片段的YAC(A~E)杂交到人类基因组某染色体的一条特异的带上。基因组DNA被切点稀有的限制性内切酶消化后的产物分别与5个放射性标记的YAC杂交,放射自显影结果如下:
(1)3条限制性酶切条带的顺序如何? (2)分别给出5个YAC与3个酶切片段的相对位置。
检测减数分裂产物。下表给出了每种类型分别与探针A和B杂交的DNA片段:
(1)这些不同孢子DNA如何产生? (2)画出对应的染色体区域。