从Ⅰ噬菌体中提取的DNA用两种只攻击单链DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶A只从突出的5端消化DNA,而
mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?
表9-3-10 | ||
滤膜上的DNA | 滤膜上的cpm | |
-RNase | +RNase | |
Ⅰ Ⅱ Ⅲ | 1250 1260 1240 | 1245 418 820 |
爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。
假定某种噬菌体颗粒含有小的线性单链DNA分子。通过CsCl离心研究它的复制方式。在CsCl中,它的密度是1.714g/cm3。含14C标记DNA的噬菌体感染生长在含3H的培养液中的细菌。于不同时间里取样,分离出DNA,对各样品进行离心。所得结果示于图6-3-42。试问这种噬菌体怎样复制它的DNA?你认为子代噬菌体会不会有14C标记?
F.W.Stahl的实验室做过下列实验。基因型为red-gamA-的噬菌体λ用13C和15N进行密度标记,再与含13C和14N的λred-gainR-混合。用该混合液在下述条件下感染大肠杆菌:抑制DNA的复制;每个细菌感染10个病毒颗粒。所产生的噬菌体在硫酸铯中离心平衡,检测分布在密度梯度中的基因型,可以观察到如图12-3-12所示的全部噬菌体和A+R+重组子的分布图谱。在第二个实验中,两种噬菌体都含有突变,该突变位置是在噬菌体遗传图左端约93%处,该实验结果见图12-3-12B。试解释两个实验结果。