下列可以用于制备重组DNA的是( )。
A.质粒
B.两个不同来源的DNA
C.限制性核酸内切酶
D.上述都是
A.质粒
B.两个不同来源的DNA
C.限制性核酸内切酶
D.上述都是
向pH=7.4的磷酸盐中加入过量CaCl2混合,制备云雾状磷酸钙溶液,用于细胞基因转染。请写出云雾状磷酸钙的胶团结构,并说明此磷酸钙胶粒为什么可以吸附DNA。
你在一种高效的克隆载体λYES(酵母一大肠杆菌中穿梭)中构建了一个cDNA文库,这种载体是由细菌噬菌体λ基因和一种可在大肠杆菌和酵母中复制的质粒重组而成,它结合了病毒和质粒克隆载体的优点。cDNA可以插入到载体的质粒部分,这样就可以在体外被包装进一个病毒衣壳,包装后的载体感染E.coli比质粒自身更有效,一旦进入E.coli,在λYES中的质粒序列可诱导脱离λ基因组进行重组并可自我复制,这就使cDNA在质粒上与λ分离,这就有利于以后的操作。
为了使克隆效率最大,载体和cDNA均用特殊的方法加以制备,在载体DNA单一独特的XhoI位点切割(5'-CTCGAG)后在dTTP存在下与DNA多聚酶一起孵育,一个制备好的钝端cDNA与一个双链寡核苷酸接头连接,这个接头由两个寡核苷酸5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC组成,其5'-末端均有磷酸基团,然后DNA和cDNA混匀并进行连接。这个方案证实非常有效,用2μg载体和0.1mg cDNA,你可以得到4×107重组分子组成的文库。
A.基因组较小
B.可以通过同源重组进行基因敲除
C.大重复DNA序列片段可以作为一个更高级的的真核生物模型
D.高密度的开放阅读框
E.基因组大小适中
A.用65℃处理5~10 min使限制性内切核酸酶失活
B. 用CIP处理载体DNA防止自身环化
C. 进行琼脂糖凝胶电泳检测
D. 上述说法都正确