下列家系中,某常染色体显性遗传病基因被认为在4号染色体上,所以针对5个4号染色体上的RFLP标记(1~5)在每个成员中作了检验。结果如下图,不同上标代表RFLP基因座的不同等位基因。
(1)说明怎样进行该实验? (2)确定哪个RFLP基因座最接近致病基因,并说出你的理由。 (3)你怎样用这种信息克隆该疾病基因?
用一个已从拟南芥克隆的基因作为放射性标记探针,与经过3种不同限制性内切酶处理的卷心菜(同科)DNA样品进行杂交。酶1处理的情况下显示出3条带,酶2处理后有1条带,酶3处理后有2条带。如何解释这一结果?
一个遗传学家想克隆脉孢菌的cys-1基因(已知该基因在5号染色体着丝粒附近),该区域附近有两个RFLP标记(RFLPl和RFLP2),他作了以下杂交。 cys-1(O型)×cys-1+(M型) 检验了100个子囊孢子的RFLP和cys-1基因型,结果如下:
(1)cys-1在染色体的这个区域吗? (2)如果是,画出cys-1基因在该区域的染色体图,标出图距。 (3)下一步怎样克隆cys-1基因?
A.由活性中心内的若干氨基酸组成
B.是一种缀合蛋白质
C.决定酶的特异性,不参与传递化学基团
D.与脱辅基酶蛋白的结合比较松散
E.一般不能用透析或超滤的方法与脱辅基酶蛋白分开
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:
表Q25.1 10个克隆的序列
注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。
A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交,定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段,确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析,推测其功能