题目内容
(请给出正确答案)
[主观题]
平滑肌肌浆球蛋白并不像骨骼肌中的肌浆球蛋白。它只在它的轻链磷酸化后才与肌动蛋白相互作用。磷酸化过程由胞
内Ca2+浓度的变化来控制,而Ca2+又是由钙调素(CaM)介导的。你已从平滑肌中纯化出肌浆球蛋白轻链激酶。但此激酶在有或无Ca2+存在时活性是一样的。你也可以加入蛋白酶抑制剂来保证纯化过程中激酶的完整性。在此条件下抽提物中的激酶元活性,除非有Ca2+存在。
表14-3-14 蛋白酶抑制剂对纯化肌动蛋白轻链激酶活力的影响 | ||
纯化表格 | 加入的试剂混合物 | 相对活力 |
负型抑制剂 | 没有 | 50 |
负型抑制剂 | Ca2+ | 50 |
负型抑制剂 | 钙调素 | 50 |
负型抑制剂 | Ca2+/钙调素 | 50 |
正型抑制剂 | 没有 | 1 |
正型抑制剂 | Ca2+ | 1 |
正型抑制剂 | 钙调素 | 1 |
正型抑制剂 | Ca2+/钙调素 | 100 |
通过凝胶过滤和离子交换层析部分地纯化激酶,接着在Ca2+存在下通过钙调素亲和柱。使人高兴的是,所有有活性的激酶均粘在柱子上,并且当用Ca2+螯合剂EDTA洗脱时能定量地洗脱下来。根据表14-3-14所示,纯化酶现在像所希望的那样,这表明了酶绝对依赖于Ca2+/钙调素。在此基础上,你可直接通过钙调素亲和柱挽救最初纯化的酶样品。令人惊奇的是激酶直接通过柱子,不论Ca2+存在与否。
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