在E.coli中,通过RNA pol同_________的结合起始转录,与转录起点碱基互补的NTP同_________亚基结合
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
A.哺乳动物的受精卵中,一些由母体mRNA产生的蛋白质翻译增加
B.母体或胚胎性RNA合成的蛋白质在翻译后可以通过磷酸化、糖基化或蛋白水解而达到修饰目的
C.胚胎时期的母体mRNA全部被激活
D.在两细胞时期,总RNA和polyA RNA水平急剧下降,进入4细胞期后,由于胚胎基因组的转录导致mRNA的水平开始上升
E.在RNA聚合酶抑制剂存在的情况下,要经过两细胞期的发育并形成新的蛋白质,还需要新的RNA的合成
mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?
表9-3-10 | ||
滤膜上的DNA | 滤膜上的cpm | |
-RNase | +RNase | |
Ⅰ Ⅱ Ⅲ | 1250 1260 1240 | 1245 418 820 |
E.coli OH157生长得特别快。在正常(较差的环境)条件下,这些菌60~70min后分裂表明复制和细胞的分裂是连续的过程,一个仅在另一个完成后才起始。假如有机会生长在一个多汁暖和的牛肉饼上,加倍的时间接近20min,这比复制过程所需的标准时间快1倍。请解释原因。详细描述原核生物中DNA的复制过程(如结构和功能特征及一系列过程)。涉及多基因组拷贝的复制却没有发生碰撞,其复制机制如何?
为了形成稳定突变,需从重组克隆宿主(E.coli)中构建Pseudomonas aeruginosa的基因文库,并把该基因文库中克隆的突变基因转入一野生型组织。用已知的接合和质粒不相容性知识设计一方案。