Ⅲ型限制酶:
A.由两个仅识别半甲基化位点的亚基组成,甲基化位点相对于限制性位点的位置决定DNA是被甲基化还是被限制。
B.具甲基化与限制活性,依赖于亚基识别位点。MS促进甲基化,R促进限制性。
C.由加强识别和甲基化或限制性的两个亚基组成,接近识别位点。
D.主要功能是错配修复,因为DNA结合是根据构象扭转而不是序列错误的识别。
E.是一种光依赖酶,对于嘧啶二聚体的光复活很重要。因为它能切除相邻嘧啶碱基交联的共价键。
A.由两个仅识别半甲基化位点的亚基组成,甲基化位点相对于限制性位点的位置决定DNA是被甲基化还是被限制。
B.具甲基化与限制活性,依赖于亚基识别位点。MS促进甲基化,R促进限制性。
C.由加强识别和甲基化或限制性的两个亚基组成,接近识别位点。
D.主要功能是错配修复,因为DNA结合是根据构象扭转而不是序列错误的识别。
E.是一种光依赖酶,对于嘧啶二聚体的光复活很重要。因为它能切除相邻嘧啶碱基交联的共价键。
A.内切酶只切两个变体中的一个。
B.它利用限制位点作为遗传标记。
C.一个给定细胞中的等位基因的核苷酸顺序从不相同。
D.它不依赖变体产物的功能。
E.对于DNA中的编码区,内切核酸酶的切点被限制。
质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点:EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性;在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形,在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
表16-2-11 | |
酶混合物 | 片段长度(kb) |
EcoRI EcoRI,BamHI EcoRI,HpaI EcoRI,SalI EcoRI,BglII EcoRI,PstI PstI,BglII BglII,HpaI | 5.7 0.4,5.3 0.5,5.2 0.7,5.0 1.1,4.6 2.4,3.3 1.3,4.4 0.6,5.1 |
质粒pBR607DNA是双链环状的,分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因,它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位:EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
表16-2-10 | |
酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
EcoRI,PstI EcoRl,BamHI EcoRI,HindⅢ EcoRI,SalI EcoRI,BamHI,PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
下列限制酶哪个或哪些可以准确切割下一段cDNA?这段cDNA可以编码多肽KIGPACF(N代表任一种核苷酸)。
限制酶 识别序列
AluI AGCT
Sau96I GGNCC
HindⅢ AAGCTT
A.在IS10R的反向重复序列的一个位点的甲基化能阻止转座酶的结合。
B.Pin的一个位点的甲基化能激发转座酶的转录。
C.dam-的突变体能提高Tn10转座1000倍。
D.复制后甲基化位点立即被半甲基化,以使转座酶能够表达和起作用。
四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参与有性接合,但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes),其参与基因转录,小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离,以进行进一步的研究。
通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构,长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24,泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体,产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24,泳道2)。用其他限制酶酶切DNA,所得片段大小加起来仍旧不足21kb,而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。
如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火,那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24,泳道3),相似地,如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火,则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24,泳道4)。
请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb?为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变?你认为核糖体小染色体的序列是什么样的?