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第2题
从非洲爪蟾的体细胞中分离染色质，并置于体外抽提液中进行转录，这时只有体细胞基因发生转录。不论体外转录抽
提液是来自卯母细胞还是来自体细胞，都发生这种情况。若在转录前用0.6mol/LNaCl洗涤染色质，这种特异性消失，卵母细胞基因也发生转录。如何说明这些结果？特异性的基因座位在何处？
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第3题
你已经建立了一个体外转录系统。使用一个已知的DNA片段，它可在一个病毒启动子的控制下被转录。当在系统中加入
纯化的RNApolⅡ、TFⅡD(TATA结合因子)和TFⅡB、TFⅡE(与RNA聚合酶结合)后，DNA开始被转录。然而，体外转录系统的低效率暗示可能有一个额外的调控序列与转录因子结合，而这种转录因子在纯化的组合当中并不存在，为了寻找与这个被推测的调控因子结合的DNA序列。你做了一系列在转录起始点上游的缺失(如图13-3-44B所示)，比较它们在纯化系统中及在细胞粗提物中的转录活性。作为内部控制，你将每种缺失体与一个能产生生长转录本的未缺失的模板混合(如图13-3-44A)。这些分析的结果(图13-3-44C)显示，一直缺失到-61，对转录仍无影响，而-11的缺失在两种系统中都会使转录受到抑制。使人惊奇的是一50位的缺失体可以像未损失的模板一样在纯化系统内进行有效的转录。但是在细胞粗提物中却没有这种作用。
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你纯化了与这种效应有关的蛋白，显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍，面对-50缺失的模板无激活作用，印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合，虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的，但当TFⅡD存在时，它可与结合位点稳定地结合。
第7题
酵母U6 sRNA基因有一个TATA框位于上游，在基因内有一个弱的A框，基因下游的远端还有一个保守的B框。体外实验时
，RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ都可以转录这个基因，但体内实验发现只有RNA聚合酶Ⅲ可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性？
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第8题
Roberts等研究了酵母U6snRNA基因的转录（Roberts.S.，Colbert，T.和HadnS．（1995)Gene.Dev.9，832-842)。该基因有
Roberts等研究了酵母U6snRNA基因的转录(Roberts.S.，Colbert，T.和HadnS．(1995)Gene.Dev.9，832-842)。该基因有一个上游的TATA框，一个内部的微弱的A框，以及远下游的一个相同的B框。在体外试验中，RNA聚合酶Ⅱ和RNA聚合酶Ⅲ都可以转录该基因。在体内，该基因可由RNA聚合酶Ⅲ介导转录而不能由RNA聚合酶Ⅱ转录。如何确定该启动子的聚合酶特异性？
第9题
基因工程操作需要用一些基本的工具酶，它们大多数来源于各种微生物。如基因与载体的切割和连接要用
各种________酶和________酶，DNA的体外合成、测序要用________酶、________酶；RNA反转录要用 ________酶等。
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第10题
一段病毒双链DNA片段中的一条链序列如下，该双链DNA片段编码称为vir-1和vir-2的两种肽。将这段双链DNA片段加
入到体外转录和翻译体系中可以产生10残基肽(vir-1)和5残基肽(vir-2)。
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AGATCGGATGCTCAACTATATGTGATTAACAGAGCATGCGGCATAAACT
第11题
克隆的进行依赖于各种参与DNA新陈代谢的______的使用，它们主要是从原核细胞中分离的。______能够将DNA切割成
特定大小的片段。各种各样的DNA聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA转录出单链DNA的______。DNA______用于连接限制性片段。克隆也需要来源于微生物的DNA序列，包括用来运载被______克隆载体。质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有______抗性基因。其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的______。人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。例如，极微量的DNA片段可以通过______得到扩增。在感兴趣基因的启动子上连接，如______或______之类的______基因能够定量检测基因的活性。
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