放射自显影技术检测细胞中的RNA合成过程,常用的放射性物质是
A.3H-A
B. 3H-C
C. 3H-U
D. 3H-G
E. 3H-T
A.3H-A
B. 3H-C
C. 3H-U
D. 3H-G
E. 3H-T
在非照射细胞中,如果RNA合成被利福平(RNA聚合酶的抑制物)阻止,复制中的DNA分子能够完成复制,但是第二轮复制不能起始。受紫外线强烈照射的细胞是否也是这样的情况?
有一系列实验,在实验中老鼠被注射了铁离子(铁盐溶液),同时加入或不加入放线菌素D(一种RNA合成的强烈抑制剂),三个小时后,小鼠死亡,把它们的肝匀浆并制备多核糖体和上清液。从每种成分中抽取RNA,然后在有放射性氨基酸存在的条件下在体外无细胞系统中进行翻译,通过掺入到蛋白中的标记量来测量蛋白合成总量,通过铁蛋白特异性抗体检测铁蛋白合成的量(如表13-3-56所示)。
表13-3-56 | ||||
Iniection | ActinomycinD | Fraction | TotalProtein Synthesis | Ferritin Synthesis |
Saline | absent | polysomes Supernatant | 750000 225000 | 700 1400 |
Iron | abSent | polysomes supernatant | 500000 400000 | 900 500 |
Saline | Dresent | polysomes supernatant | 800000 600000 | 800 3000 |
Iron | Dresent | polysomes supernatant | 780000 550000 | 1380 700 |
(数字表示参入总蛋白或铁蛋白中的放射活性cpm) |
A.哺乳动物的受精卵中,一些由母体mRNA产生的蛋白质翻译增加
B.母体或胚胎性RNA合成的蛋白质在翻译后可以通过磷酸化、糖基化或蛋白水解而达到修饰目的
C.胚胎时期的母体mRNA全部被激活
D.在两细胞时期,总RNA和polyA RNA水平急剧下降,进入4细胞期后,由于胚胎基因组的转录导致mRNA的水平开始上升
E.在RNA聚合酶抑制剂存在的情况下,要经过两细胞期的发育并形成新的蛋白质,还需要新的RNA的合成
mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?
表9-3-10 | ||
滤膜上的DNA | 滤膜上的cpm | |
-RNase | +RNase | |
Ⅰ Ⅱ Ⅲ | 1250 1260 1240 | 1245 418 820 |