A.制备目的基因和相关载体;
B.将目的基因和有关载体进行连接;
C.将重组的DNA导入受体细胞;
D.DNA重组体的筛选和鉴定;
E.DNA重组体的扩增和表达。
A.获得目的基因-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
B.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达
C.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-重组DNA分子转移如宿主细胞增殖-扩增目的基因-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-目的基因表达
D.获得目的基因-目的基因与载体基因连接-筛选含重组DNA分子的细胞克隆-扩增目的基因-目的基因表达-重组DNA
A.基因载体的选择与构建
B.目的基因与载体的连接
C.重组DNA分子导入受体细胞
D.筛选并克隆含重组体的受体细胞
E.表达目的基因编码的蛋白质
A.同聚尾法连接效率高,且易回收插入的片段
B.不匹配的黏性末端可通过部分填补后连接
C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性,将有利于重组连接
D.平末端连接时,在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率
E.Mg2+/ATP是T4DNA连接酶反应时的必要因素
A.用65℃处理5~10 min使限制性内切核酸酶失活
B. 用CIP处理载体DNA防止自身环化
C. 进行琼脂糖凝胶电泳检测
D. 上述说法都正确