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图Q25.10 10kb片段二种酶切图谱
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高，平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链，\表示切割位点)。这个位点有一个优点，即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱，请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小，以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段，以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢？
A.必须有可能清晰地分离各个染色体(通过脉冲场凝胶电泳)
B. 必须从单倍体细胞(配子)中分离DNA，这样避免了由二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰信息
C. 必须进行单个染色体分析，这只能在细胞分裂后期进行
D. 必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶
E. 必须首先分离核DNA和细胞器DNA，然后对它们分别作图
下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先，利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记上32P。样品分成两半，每份用酶Ⅰ或酶Ⅱ酶解。两份酶解物分别进行电泳，记下放射性带。这个实验鉴定出末端片段，提供的信息后面有用。该技术的要点是同时利用未标记的和均一标记的DNA样品。未标记样品用酶Ⅰ酶解，进行电泳时采取措施使条带较宽。用标准的溴化乙锭荧光技术定位这些条带，记录它们的位置，将凝胶浸在碱性溶液中使DNA变性，然后将条带转移到硝酸纤维素膜上，得到图16-3-13所示的谱型。32P标记的样品用酶Ⅱ处理、电泳、记录条带位置，将DNA碱变性，然后转移到含酶Ⅰ片段的硝酸纤维素膜上。转移时使弛P条带与未标记的条带成正交，如图6-3-13所示。然后将膜置于复性条件，洗涤，用放射自显影定位放射性。图16-3-13显示每条胶中条带位置(细线)和放射性位置(小圆点)。标有星号的条带是末端片段。试画出每种酶的限制酶图谱。数字表示每个片段的长度(kb)，实心圈表示放射性区域。
