纯化基因组DNA必须切割成合适大小的片段才能与载体构成重组,一般常用的切割方法有( )。
A.物理剪切法
B.化学法
C.限制性内切酶消化法
D.生物法
A.物理剪切法
B.化学法
C.限制性内切酶消化法
D.生物法
四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参与有性接合,但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DNA片段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes),其参与基因转录,小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离,以进行进一步的研究。
通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构,长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24,泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体,产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24,泳道2)。用其他限制酶酶切DNA,所得片段大小加起来仍旧不足21kb,而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。
如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火,那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24,泳道3),相似地,如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火,则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24,泳道4)。
请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb?为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变?你认为核糖体小染色体的序列是什么样的?
A.必须分离纯化出个体染色体。
B.DNA必须仅从单倍体细胞(基因组)分离,这可避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而引起的模糊信息。
C.必须进行单个染色体分析,这样的分析仅在细胞分裂后期才有可能进行。
D.必须发现一些在染色体上仅有一个切割位点的限制酶。
E.必须先分离核DNA和细胞器DNA,然后用它们来分析个体的图谱。
从原位杂交结果知道,5个含有基因组片段的YAC(A~E)杂交到人类基因组某染色体的一条特异的带上。基因组DNA被切点稀有的限制性内切酶消化后的产物分别与5个放射性标记的YAC杂交,放射自显影结果如下:
(1)3条限制性酶切条带的顺序如何? (2)分别给出5个YAC与3个酶切片段的相对位置。
野生型噬菌体X4DNA用限制酶处理后,用凝胶电泳分离纯化得5个片段Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V。现通过与X4的遗传图(图16-3-9)比较来对这些片段定位。用图16-3-9所示5种突变进行25次转染试验。实验包括:从单突变体得到的完整DNA以及纯化的片段,用它对Rec+细胞进行转染。数据如表16-3-9所示(数值表示每微克完整DNA分子产生的噬菌斑数)。试问片段的顺序如何(自图的左边开始)?
表16-3-9 | |||||
突变体 | |||||
Ⅰ | Ⅱ | Ⅲ | Ⅳ | Ⅴ | |
a- b- c d- e- | 21 6 32681 1 22 | 14 0 16 3 17 813 | 21842 4 8 0 27 | 3 4856 11 1 18 | 8 2 13 1825 30 |
A.DNA空间结构的暴露部分往往被选择为诱变反应的DNA部分。
B.那些易于进一步获得修饰(如脱氨基作用)的修饰碱基的存在,导致碱基的转变和复制后的突变。
C.在复制中容易错误配对的修饰碱基的存在,产生了突变。
D.富含A·T的DNA片段的存在,这些片段自发解离和形成碱基误配核苷酸。
E.对同义突变的低选择(压力),因此热点总是由于密码子中第三个碱基引起。