在真核细胞中DNA折叠成为染色质是如何影响转录的?你可以应用C-负转录单元解决这个问题。这个模板在RNApolⅡ及四个转录因子(TFⅡA、TFⅡB、TFⅡD和TFⅡE)存在下能很好地转录。
为了检验染色质对转录的影响,首先将模板装配成核小体(核小体来自蛙卯母细胞抽提物)并纯化染色质模板,然后加入转录组分,结果没有发生转录(图13-3-48)。然后改变步骤,首先,在缺少NTPs的情况下将模板和转录组分一起温育,然后将模板装配为核小体,再纯化染色质模板。现在,当要再加入转录组分时,转录顺利进行就如在裸露的DNA模板上进行的转录一样,这样得出结论:一个或多个转录组分一定同模板结合,然后使启动子可以接近。
为了更进一步了解这种现象,再做两个附加实验。在第~个实验中,在温育过程中少加一种转录组分;在第二个实验中,在进行转录分析中少加一种转录组分。
用单链环状噬菌体DNA作为模板,有可能在大肠杆菌抽提液中合成前体片段(冈崎片段)。反应所产生的DNA链与环状模板互补,一端带有RNA片段。当用4种α32P标记的脱氧核糖核苷三磷酸进行合成,而产物再降解成3'-核苷酸时,放射性在这4种核苷酸中的分布列入表6-3-25的第一行中。下面4行列入在4种脱氧核糖核苷三磷酸中只有一种是放射性时的结果。
表6-3-25 | ||||
32P标记底物 | 分离的3'-核苷酸 | |||
Ap | Gp | Cp | UP | |
每个生长点片段的32P原子 | ||||
4种核苷酸 dATP dGTP dCTP dTTP | 0.99 0.20 0.72 <0.01 0.08 | <0.01 — — — — | <0.01 — — — — | <0.01 — — — — |
如果将纯化的大肠杆菌RNA聚合酶全酶(全酶中包含有δ亚基)在四种必需的核苷三磷酸存在的条件下加入到DNA,就合成RNA。对所得到的RNA进行长度分析,表明mRNA分子的长度分布范围很广,且长度的分布是连续的。如果加入少量的细胞抽提液(已证实不含有核酸酶),则观察到长度不连续的较小的片段,试问抽提液中存在什么?
图Q25.10 10kb片段二种酶切图谱