如果将纯化的大肠杆菌RNA聚合酶全酶(全酶中包含有δ亚基)在四种必需的核苷三磷酸存在的条件下加入到DNA,就合
如果将纯化的大肠杆菌RNA聚合酶全酶(全酶中包含有δ亚基)在四种必需的核苷三磷酸存在的条件下加入到DNA,就合成RNA。对所得到的RNA进行长度分析,表明mRNA分子的长度分布范围很广,且长度的分布是连续的。如果加入少量的细胞抽提液(已证实不含有核酸酶),则观察到长度不连续的较小的片段,试问抽提液中存在什么?
如果将纯化的大肠杆菌RNA聚合酶全酶(全酶中包含有δ亚基)在四种必需的核苷三磷酸存在的条件下加入到DNA,就合成RNA。对所得到的RNA进行长度分析,表明mRNA分子的长度分布范围很广,且长度的分布是连续的。如果加入少量的细胞抽提液(已证实不含有核酸酶),则观察到长度不连续的较小的片段,试问抽提液中存在什么?
利用一个包含纯化的RNA聚合酶的核心酶、DNA模板、σ因子以及标记核苷酸(32pppN)的系统,来研究σ因子在原核转录中的作用。在10-10mol和10-11mol两种不同浓度的核心酶催化下32P掺入到RNA的图如下所示,σ因子浓度恒定为10-12mol。
因子通常已经失活。你可以想出一个极好的方法以加快分析速度。你可以合成一段不含胞嘧啶核苷酸的DNA序列,将这段序列放到启动子后在一适当反应混合物中温育,这个启动子将指导不含鸟嘌呤核苷酸的转录本的合成,如果不加GTP,只产生一定长度的RNA转录本,这个RNA转录本来自于合成的DNA序列。因为其他转录本都在需G处被终止。如果你能使这个想法得到实现,则快速分析特殊序列的转录仅通过测量标记核苷酸的放射性就可实现。
为了验证你的想法,你构建两个携带合成DNA的质粒。一个具有腺病毒的启动子(PmL1),另一个无启动子(PC1)。把两种质粒同纯化的RNApolⅡ、纯化好的转录因子样品及32P-CTP混合,除此之外,再加入各种组合的GTP、RNaseT1(可以切开RNA与G的连接)和3'-氧甲基GTP(无论何时它参入正在形成的链,它就会终止转录),通过凝胶电泳测定结果如图13-3-42所示。
如果线状DNA分子按Y结构复制,根据DNA和大肠杆菌DNA聚合酶的哪些特征才使两条链的复制不能以同一方向伸展(如图6-3-28所示)?细胞怎样解决了这个问题?
测定纯化的小分子RNA碱基顺序时,通常第一步是用T1核糖核酸酶对RNA进行有限时间的处理,将RNA降解成两个、三个或四个片段,并用离子交换柱进行分离。
你纯化了与这种效应有关的蛋白,显示它使非缺失的模板及-61缺失的模板转录都增强了10倍,面对-50缺失的模板无激活作用,印迹分析表明这个因子同一个TATA位点上游的特殊的短序列相结合,虽然这种因子在TFⅡD缺乏时同它的结合位点的结合是短暂的,但当TFⅡD存在时,它可与结合位点稳定地结合。
从噬菌体MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细菌),这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处理,就会失去感染能力;另外,如果标记感染的RNA,在子代中不出现标记。解释这些现象。
假设几乎内含子刚被转录出(即合成了约500个核苷酸的RNA),一个剪接体就组装在玉米丙糖磷酸异构酶基因(含大约3400个碱基对)的第一个内含子处。如果剪接反应直到转录终止才发生,剪接体应当稳定多长时间?假设玉米RNA聚合酶Ⅱ的转录速度为每秒30个核苷酸。