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[主观题]

用DNA探针同RNA分子杂交在测定一已知基因在某一细胞中是否表达时是很有用的,但不能用于检测转录起始位点、终

止位点或内含子的位置。
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第1题
在杂交之前先用凝胶电泳将粗提取物中的RNA或DNA分子进行分离,假定杂交后只有一种或少数几种大小的片段被探
针杂交上了,就能肯定这种杂交是特异性的。
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第2题
爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且

爪蟾卵母细胞在卵的发育后期用3H-尿苷同步标记。从卵母细胞中分离的放射性细胞质总RNA与由成体爪蟾提取的且呈单链形式结合在滤膜上的DNA进行杂交。该RNA:DNA杂交分子与原肠胚期爪蟾胚胎的非标记细胞质总RNA相竞争。图13-3-68A是假设的结果。在另一相应但相反的实验中,放射性原肠胚期细胞质RNA(原肠胚期胚胎用3H-尿苷标记)与滤膜上的总DNA杂交,该RNA:DNA杂交分子与非标记的后期卵细胞质RNA相竞争,结果如图13-3-68B。

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第3题
mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DN

mRNA往往是用各种杂交技术检测的,也就是通过mRNA与单链DNA一起保温,形成DNA-RNA杂交物。有一种技术,把单链DNA吸附在硝酸纤维素滤膜上,加上放射性标记的RNA,然后在导致杂交作用的条件下将混合物保温。游离RNA并不结合到滤膜上,所以滤膜洗涤后所结合的放射性量就是被杂交的RNA量。在某实验中,从感染噬菌体1分钟的细胞中分离出放射性mRNA,然后与分别吸咐在滤膜上的三种不同的DNA分子杂交。DNA分子如图9-3-10所示,其中的数字表示离DNA左侧的距离,相对距离范围为0~100。用野生型噬菌体(Ⅰ)感染细菌。在噬菌体DNA分子Ⅱ和Ⅲ中的阴影区代表噬菌体携带的细菌DNA。接着在两张滤膜上对各类DNA进行杂交试验,吸附有每一类DNA的一张滤膜与核酸酶一起保温(RNase,该酶酶解单链RNA但不酶解杂交的RNA);另一张滤膜不用酶处理(-RNase)。得到的数据如表9-3-10所示。试问mRNA从野生型DNA中的哪个区域转录?

表9-3-10

滤膜上的DNA滤膜上的cpm
-RNase+RNase

1250

1260

1240

1245

418

820

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第4题
分别从胚胎细胞和成熟的B淋巴细胞中提取DNA,用限制酶酶切后做DNA电泳并转膜。以抗体分子的轻链cDN
A作探针进行杂交,结果如下图。解释实验结果。

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第5题
某些酵母菌株的细胞质中,含有周长为2μm的环状DNA分子。一些菌株中的这类DNA分子有单一的EcoRⅠ位点
,另一些菌株中有两个这样的位点。生成的二倍体芽中,两种DNA分子都存在。 (1)2μm DNA分子的遗传方式是否与线粒体相同? (2)用放射性标记的2μm DNA作为探针,与从二倍体细胞所产生的子囊孢子中提取的,经过EcoRⅠ处理的DNA进行杂交,会得到什么结果?

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第6题
DNA受热变性时()。

A.在260nm波长处的吸光度增加

B.多核苷酸链断裂成寡核苷酸链

C.碱基对形成的氢键断裂

D.加入互补RNA链经缓慢冷却后可形成DNA/RNA杂交分子

E.溶液黏度增加

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第7题
用不同种类的变性DNA分子复性来制取杂交DNA时,常常留有一些不能复性的DNA。用哪些方法可除去这些不能复性的D
NA?
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第8题
以下哪个不是Southern blot的一个步骤?

A.用限制酶消化DNA。

B.把DNA连接入一个载体。

C.在胶上分离DNA片段

D.把DNA片段转移到硝酸纤维素膜上。

E.膜与标记的探针杂交。

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第9题
某细胞对激素作出应答而合成物质x。在该细胞培养物接触H前,能在细胞核中发现有大的RNA分子。该分子具有帽结构
和poly(A)尾。加入H后,没有发现这种RNA,但出现第二种RNA,它在体外蛋白质合成系统中合成X,这种RNA存在于细胞质多核糖体中。两种RNA分子都能与克隆出的同种DNA分子杂交。合成X的激素控制可能利用了哪种简单机制?
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第10题
在构建cDNA克隆之前,可以用______来富集一特殊的核苷酸序列。做法是:用来自于能够产生目的蛋白的细胞mRNA分
子同来自于另一类型细胞(不产生这种蛋白质,但亲缘关系密切)的过量mRNA分子杂交。
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第11题
DNA的转录是不对称的,因此E.coli DNA最多只有__________能与所有已知的E.coli RNA杂交。

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