题目内容
（请给出正确答案）
欲制备45 kb的DNA片段的克隆，应选择的载体和宿主为()。
A．BAC、大肠杆菌
B．YAC、酵母
C．λ噬菌体、大肠杆菌
D．黏粒、大肠杆菌
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质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
| 表16-2-11 | |
| 酶混合物 | 片段长度(kb) |
| EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI | 5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1 |
利用平均分子量为107U的片段，建立包括99%猴基因的猴DNA(分子量为1.74×1012U)基因库，需多少个克隆？
某双链DNA，以32P标记5’端，然后分别用EcoRⅠ和BamHⅠ酶切，得到下列长短的片段(单位为kb)，*表示带标记片段。 EcoRⅠ：2．8、4．6、6．2 *、7．4、8．0 * BamHⅠ：6．0 *、10．0 *、1 3．0 如果不带标记的DNA用两种酶同时切割，会得到下列片段：1．0，2．0，2．8，3．6，6．0，6．2，7．4。 两种酶的酶切图谱是什么？
假定你获得了一病毒的dsDNA，并全部进行了克隆，并用有限的几种酶对该病毒基因组DNA进行了酶切分析(图Q25.11)，图中所示数字的单位是kb。
图Q25.11 假设的某病毒基因组DNA的限制性酶切图谱
质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
A.通过DNA连锁分析确定待分离基因在染色体上的大概位置
B.进行分子杂交，定位基因在染色体上的具体位置
C.研究该区域内的已知基因、ORF、EST或cDNA片段，确定进一步研究对象
D.通过cDNA筛选、外显子捕获或物理捕获法在该区域内寻找和鉴定基因
E.对找到的“基因”的核苷酸序列进行分析，推测其功能
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高，平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链，\表示切割位点)。这个位点有一个优点，即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱，请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小，以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段，以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢？
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后，连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间，二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1)，分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后，电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后，用载体上的DNA作为探针进行杂交，结果如下图所示：
1.jpg)
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点，标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2)，用同样的酶切、电泳、转膜后，以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交，结果如下图所示：
2.jpg)
画出克隆2的图，标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切，并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交，结果如下图所示：
3.jpg)
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。
果蝇中P因子的转座酶由4个外显子(0，1，2，3)编码。此基因在生殖细胞中的转录产物长度为2．1 kb，包含所有这4个外显子，并编码具有转座酶活性的蛋白质。体细胞中P因子的转录产物长度为2．5 kb，除了含有全部的4个外显子之外，位于外显子2和3之间的内含子也被保留下来。 (1)体细胞中产生的较长的mRNA编码的蛋白质的大小只相当于在生殖细胞中产生的较短的转录产物编码的蛋白质的75％。较长的转录产物为什么会编码较小的蛋白质产物？ (2)反转录酶能够用来从mRNA合成得到相应的双链DNA，这个DNA拷贝称为cDNA。如何利用cDNA和转基因技术得到在体细胞中也有转座酶活性的果蝇？ (3)假设用限制酶SaZ工消化P因子后得到8个片段。用来自果蝇生殖细胞的转座酶的cDNA作为探针对它们进行Southern杂交，结果发现所有的8个限制酶切片段都显示阳性条带。上述结果说明了什么？
