可识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割dsDNA的一类酶称为()。A.限制性外切核酸酶B.限
可识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割dsDNA的一类酶称为()。
A.限制性外切核酸酶
B.限制性内切核酸酶
C.非限制性外切核酸酶
D.非限制性内切核酸酶
E.DNA 内切酶
可识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割dsDNA的一类酶称为()。
A.限制性外切核酸酶
B.限制性内切核酸酶
C.非限制性外切核酸酶
D.非限制性内切核酸酶
E.DNA 内切酶
A.由两个仅识别半甲基化位点的亚基组成,甲基化位点相对于限制性位点的位置决定DNA是被甲基化还是被限制。
B.具甲基化与限制活性,依赖于亚基识别位点。MS促进甲基化,R促进限制性。
C.由加强识别和甲基化或限制性的两个亚基组成,接近识别位点。
D.主要功能是错配修复,因为DNA结合是根据构象扭转而不是序列错误的识别。
E.是一种光依赖酶,对于嘧啶二聚体的光复活很重要。因为它能切除相邻嘧啶碱基交联的共价键。
SR蛋白( )。
A. 家族中的成员都具有一个或多个精氨酸和丝氨酸丰富区
B. 分别与特异的RNA序列结合
C. 形成一个蛋白质桥连接U2AF和U1 snRNP
D. 与3'外显子的剪接增强序列结合,促进3'弱剪接位点的作用
E. 帮助识别外显子
F. 以上都正确
A.限制酶是外切酶,而不是内切酶。
B.限制酶在特异性序列,即识别位点切割DNA。
C.限制酶能切割DNA而产生一致的末端序列。
D.一些限制酶在其识别位点切割两条DNA链的位置略有不同,形成粘端。
E.一些限制酶在其识别位点切割两条DNA链的位置略有相同,形成钝端。
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高,平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链,\表示切割位点)。这个位点有一个优点,即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱,请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小,以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段,以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢?
真核细胞编码蛋白质基因的启动子包含了一个基本的启动元(promotor element),这个启动元可被RNA聚合酶Ⅱ以及一些基本的转录因子(如TFⅡD,TFⅡB等)识别。但是启动子自身的基本活性很低,而且结合于启动子邻近上游区(-120~-30)或更远的增强小区域的其他特殊转录因子,对它有不变的影响。分析这些调控区发现它们一般包含有许多不同的序列特异性转录因子的结合位点。
用转染试验分析这样一个复合物调控区的某一单因子识别位点表明,结合位点的活性较低。但是连接这一结合位点的多重拷贝在一起经常会产生协同促进作用。下面显示的是关于转录因子FE结合位点的DNA保守序列(20bp)的数据。克隆这个保守DNA序列在基础启动子(basal promoter)和报道基因(reporter gene)的上游。并导入细胞培养48hr。如何叙述该实验中的激活模式?
表13-3-19 | |
拷贝数 | 报道基因活性 |
0 1 2 3 4 | 20 30 135 125 460 |
有人建议用PCR扩增同该蛋白质结合的微量DNA,思路是(图Q25.8):①合成一组长为26个碱基的随机序列的寡聚核苷酸混合体,在该序列的两侧各有一段25个碱基的序列作为PCR扩增的引物位点[图Q25.8(a)];②把这些寡聚核苷酸加到含有转录因子的细胞粗提取物中,转录因子可以同含有结合位点的寡聚核苷酸结合;③用转录因子特异的抗体分离同转录因子结合的寡聚核苷酸;④用PCR扩增选择到的寡聚核苷酸进行序列分析。
图Q25.8 用随机的寡聚核苷酸选择和扩增特异的DNA序列(a)用于选择的原初随机序列的寡聚核苷酸,N代表任何一种核苷酸;EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点有利于选择DNA的克隆和序列分析。(b)同序列特异的DNA结合蛋白结合的寡聚核苷酸的选择和序列分析方案按照这一思路,用0.2ng单链随机序列的寡聚核苷酸开始了这项实验,这个寡聚核苷酸可以同一个PCR引物结合成部分双链,经过如图Q25.8(b)所示的四轮选择和复制后,用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ消化分离到的DNA,将片段克隆到质粒中,并测定了10个独立的克隆(表Q25.1),问:
表Q25.1 10个克隆的序列
注:画线的序列是PCR引物部位,两种序列都是从BamH Ⅰ末端开始,所有序列中结合位点的方向都是相同的。
A.即使只用一种限制酶,因为DNA是线性的,所以也可以迅速确定限制性片段序列
B. 内切核酸酶在等距离位点切割DNA,同时对于每个生物体的长度是特异的
C. DNA的线性意味着单限制酶切片段的长度之和等于DNA的总长,而双酶切产生的重叠片段则产生模糊的图谱
D. 这些内切核酸酶的消化活性是物种特异的
E. 这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息