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[主观题]

将α-磷酸上标记32P的dATP、dTTP、dGTP和dCTP加入到大肠杆菌可溶性提取液中,温育一段时间。然后用三氯乙酸处理

将α-磷酸上标记32P的dATP、dTTP、dGTP和dCTP加入到大肠杆菌可溶性提取液中,温育一段时间。然后用三氯乙酸处理混合液,使DNA沉淀,但脱氧核苷三磷酸不沉淀。分析沉淀的放射性强度可以测定由前体合成DNA的量。

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第1题
最近邻碱基分析技术用来测定在酶促合成的DNA中某一特定核苷酸与四种核苷酸中的每一种相邻的频率。在三种非标
记和第四种在α上带32P标记的脱氧核糖核苷三磷酸存在下进行合成。合成的标记DNA再用核酸酶降解,该酶作用于每个磷酸基团的5'侧,因而产生3'单核苷酸。这样,在dATP内的α-32P就留给了在5'侧与该A残基相邻的核苷酸上,举例如下(箭头指酶解位点):

pXpApYpZ→Xp+Ap+Yp+…

↑↑↑↑

这样,从Ap、Gp、Cp和Tp得到的放射性标记相对量就分别表示在合成的DNA中二核苷酸ApA、GpA、CpA和TpA的相应频率。在合成反应中用另一种标记的三磷酸,如α-32P-dTTP,则可得到ApT、GpT、CpT和TpT的频率。依此类推,可得到所有16种可能的二核苷酸的频率。对于某一特定的DNA分子,一些最邻近频率为:ApG,0.15;GpT,0.03;GpA,0.08;TpT,0.10。在每种情况下最邻近碱基均按5'→3'方向书写。

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第2题
用单链环状噬菌体DNA作为模板,有可能在大肠杆菌抽提液中合成前体片段(冈崎片段)。反应所产生的DNA链与环状模

用单链环状噬菌体DNA作为模板,有可能在大肠杆菌抽提液中合成前体片段(冈崎片段)。反应所产生的DNA链与环状模板互补,一端带有RNA片段。当用4种α32P标记的脱氧核糖核苷三磷酸进行合成,而产物再降解成3'-核苷酸时,放射性在这4种核苷酸中的分布列入表6-3-25的第一行中。下面4行列入在4种脱氧核糖核苷三磷酸中只有一种是放射性时的结果。

表6-3-25

32P标记底物分离的3'-核苷酸
ApGpCpUP
每个生长点片段的32P原子
4种核苷酸

dATP

dGTP

dCTP

dTTP

0.99

0.20

0.72

<0.01

0.08

<0.01

<0.01

<0.01

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第3题
如果RNA聚合酶和4种核糖核苷三磷酸不与4种脱氧核糖核苷三磷酸一起添加,SC3噬菌体的单链环状DNA分子就不能用
聚合酶Ⅲ复制。产物是一种含少量核糖核苷酸的双链开环DNA。为了分析起始的核苷酸顺序,使用α-32P标记的脱氧核苷三磷酸,核糖核苷三磷酸上不标记。反应产物用碱处理,某些释放的放射性只进入腺苷3'-P(非脱氧型)。
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第4题
在一DNA复制体系中,以同位素32P标记的α-磷酸基dNTP为原料合成DNA,从原代起至少在第几代即可得到两条链均带32P标记的子代DNA链。()

A.第二代

B.第三代

C.第四代

D.第六代

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第5题
下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记

下述精巧的方法曾用来构建不同酶的DNA分子的限制酶图谱。首先,利用多核苷酸酶将噬菌体DNA的5'-末端标记上32P。样品分成两半,每份用酶Ⅰ或酶Ⅱ酶解。两份酶解物分别进行电泳,记下放射性带。这个实验鉴定出末端片段,提供的信息后面有用。该技术的要点是同时利用未标记的和均一标记的DNA样品。未标记样品用酶Ⅰ酶解,进行电泳时采取措施使条带较宽。用标准的溴化乙锭荧光技术定位这些条带,记录它们的位置,将凝胶浸在碱性溶液中使DNA变性,然后将条带转移到硝酸纤维素膜上,得到图16-3-13所示的谱型。32P标记的样品用酶Ⅱ处理、电泳、记录条带位置,将DNA碱变性,然后转移到含酶Ⅰ片段的硝酸纤维素膜上。转移时使弛P条带与未标记的条带成正交,如图6-3-13所示。然后将膜置于复性条件,洗涤,用放射自显影定位放射性。图16-3-13显示每条胶中条带位置(细线)和放射性位置(小圆点)。标有星号的条带是末端片段。试画出每种酶的限制酶图谱。数字表示每个片段的长度(kb),实心圈表示放射性区域。

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第6题
如果把某细胞染色体上的一分子DNA两条链用32P标记,此细胞连续4次有丝分裂后,含有标记链的细胞占(

如果把某细胞染色体上的一分子DNA两条链用32P标记,此细胞连续4次有丝分裂后,含有标记链的细胞占()。

A.1/2

B.2012-1-4

C.2012-1-8

D.:1/16

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第7题
将正在进行转录和RNA加工的真核细胞与船P标记的ATP温育。那么在成熟mRNA的哪个部位会出现放射性核素?假设32P

将正在进行转录和RNA加工的真核细胞与船P标记的ATP温育。那么在成熟mRNA的哪个部位会出现放射性核素?假设32P标记在ATP的(a)α位;(b)β位;(c)γ位。

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第8题
Hershey和Chase用放射性同位素35S标记噬菌体的(),用32P标记了噬菌体的()。从细菌中释放出

Hershey和Chase用放射性同位素35S标记噬菌体的(),用32P标记了噬菌体的()。从细菌中释放出的被新复制的噬菌体中只检测到了32P标记的(),而没有检测到35S标记的()。证明噬菌体繁殖时()得到复制并且控制了新()的合成。

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第9题
除了聚合作用外,DNA聚合酶Ⅰ还具有3'→5'校正核酸外切酶的活性,在把错配碱基从新合成DNA链末端切去的
校正过程中发挥作用。为了鉴定这种活性,你制备了人工合成的poly(A)链和poly(T)链作为底物,其中poly(T)链上含一段32P标记的dT残基,同时其3'端还连了几个3H标记的dC残基,如图Q2.3所示。分别统计:在没有任何dTTP存在,DNA不可能合成以及有dTTP存在,DNA可以合成的两种情况下,标记dT和dC残基的丢失,结果如图Q2.4所示。

图Q2.3研究大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ校正功能的人工底物黑体字母表示被放射性标记的核苷酸

图Q2.4 DNA聚合酶Ⅰ在不含dTTP(a)和含有dTTP(b)时的校正功能

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第10题
用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每

用HindⅢ限制酶处理某DNA大分子,得到一个DNA片段。该酶作用于如图2-3-50A中箭头所示的特定碱基顺序。为测定每条链的顺序,将5'-末端用32P标记(通过多核苷酸激酶催化的反应),再用Maxam-Gilbert序列法测定。切得片段的混合物经电泳后可得到如图2-3-50B所示的图谱(图中迁移方向为自上而下,片段越小移动距离越远)。仔细观察一下电泳图谱,回答下列问题:

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第11题
你想证明某种噬菌体的遗传物质是DNA而不是蛋白质。你设想的一个实验类似于捣碎实验,但遗憾的是这种噬菌体尾
巴短,不能用捣碎器使它从细胞壁上脱开。你已知道分离和纯化子代噬菌体的方法。你制备了32P和35S双标记的噬菌体,感染了细菌,并从感染细菌中收集了子代噬菌体。下面的哪一个结果可作为证据支持你的设想?并说明理由。

35S不会出现在子代噬菌体中。

32P总是出现在几个子代的噬菌体中,但是每个噬菌体中的含量比亲代噬菌体颗粒中的含量少得多。35S不出现在噬菌体颗粒中。

32P只出现在一或二代的噬菌体颗粒中,并只出现在一条DNA链上。35S出现在许多子代在噬菌体中,每个噬菌体的含量比亲代噬菌体颗粒中的含量少得多。

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