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[主观题]
限制酶BamHI和PstI切割其识别的序列如图16－3－18所示。
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质粒pBR607DNA是双链环状的，分子量为2×106U。这个质粒带有两个基因，它们所编码的蛋白质产物使宿主细菌对四环素和氨苄青霉素具有抗性(Tet-r和Amp-r)。该DNA对下列限制酶只有一个识别部位：EcoRI、BamHI、HindⅢ、PstI和SaII。将DNA克隆到EcoRI部位并不影响对两种药物的抗性。将DNA克隆到BamHI、HindⅢ和SaII部位则破坏四环素抗性。克隆到PstI部位破坏氨苄青霉素抗性。用下列限制酶混合物消化可得到如表16-2-10所列的片段。试在限制酶图上标出相对于EcoRI切点的PstI、BamHl、HindⅢ和SalI的切点。
| 表16-2-10 | |
| 酶混合物 | 片段分子量(×106U) |
| EcoRI，PstI EcoRl，BamHI EcoRI，HindⅢ EcoRI，SalI EcoRI，BamHI，PstI | 0.64.2.14 0.2.2.4 0.05.2.55 0.55.2.05 0.2.0.64.1.94 |
质粒pHUBI DNA是双链环状，长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因，它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点：EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性；在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形，在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
| 表16-2-11 | |
| 酶混合物 | 片段长度(kb) |
| EcoRI EcoRI，BamHI EcoRI，HpaI EcoRI，SalI EcoRI，BglII EcoRI，PstI PstI，BglII BglII，HpaI | 5.7 0.4，5.3 0.5，5.2 0.7，5.0 1.1，4.6 2.4，3.3 1.3，4.4 0.6，5.1 |
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高，平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链，\表示切割位点)。这个位点有一个优点，即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱，请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小，以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段，以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢？
图13-3-5所示的是一段基因组DNA的限制酶图谱以及与其对应的cDNA限制酶谱图。这段基因组DNA中有多少个内含子？它们在哪里？
限制酶简写：B：BamHI；C：ClaI；H：HindⅢ；R：EcoRI；S：SalI；AAA：poly(A)尾。
限制酶A和B分别用来切割噬菌体T5和T7的DNA。某段T5片段与某段T7片段混合形成环，并可用DNA连接酶封口。对这两种酶可得出什么结论？
