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构建基因组DNA文库时,通常需分离细胞的核酸部分是( )
A.染色体DNA
B.线粒体DNA
C.总mRNA
D.tRNA
E.rRNA
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A.染色体DNA
B.线粒体DNA
C.总mRNA
D.tRNA
E.rRNA
克隆文库的构建通常是以一个识别4个碱基序列的限制酶(这些酶切割频率相对较高,平均每256碱基对有1个切点)不完全消化基因组DNA完成的。酶Sau3AI识别序列是5'-\GATC-3'(只写上面一条链,\表示切割位点)。这个位点有一个优点,即Sau 3AI消化片段可被克隆入以BamHI(5'-G\GATC-3')或BglⅡ(5'-A\GATCT-3')消化的载体上。图16-3-17是YFG1基因周围Sau3AI位点的限制性图谱,请列出以Sau3AI完全消化这个片段得到限制性片段的大小,以及不完全Sau3AI消化时产生片段的大小。如果分离一个包含完整YFGl基因的片段,以不完全消化建立文库的重要性在哪里呢?
A.必须分离纯化出个体染色体。
B.DNA必须仅从单倍体细胞(基因组)分离,这可避免由于二倍体细胞中同源染色体的存在而引起的模糊信息。
C.必须进行单个染色体分析,这样的分析仅在细胞分裂后期才有可能进行。
D.必须发现一些在染色体上仅有一个切割位点的限制酶。
E.必须先分离核DNA和细胞器DNA,然后用它们来分析个体的图谱。
A.必须有可能清晰地分离各个染色体(通过脉冲场凝胶电泳)
B. 必须从单倍体细胞(配子)中分离DNA,这样避免了由二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰信息
C. 必须进行单个染色体分析,这只能在细胞分裂后期进行
D. 必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶
E. 必须首先分离核DNA和细胞器DNA,然后对它们分别作图
人类基因组DNA经过Sau3A(G↓ATC)部分酶切后,连接到载体pCU999的BamHⅠ位点上 (G↓GATCC)。BamHⅠ位于多克隆位点的SalⅠ和NotⅠ之间,二者距离20 bp。 (1)从文库中分离出某克隆(克隆1),分别用NotⅠ(N)、SalⅠ(S)或SalⅠ十NotⅠ(S十N)酶切后,电泳分离并用EB染色。DNA转移到膜上后,用载体上的DNA作为探针进行杂交,结果如下图所示:
假设同源序列50 bp以下则无杂交信号。在此基因组DNA上标上所有的SalⅠ和NotⅠ位点,标明酶切位点间距离。 (2)从同样的文库中分离到带有重叠片段的克隆(克隆2),用同样的酶切、电泳、转膜后,以克隆1的DNA为探针(包括基因组DNA和载体DNA)进行southern杂交,结果如下图所示:
画出克隆2的图,标明所有SalⅠ和NotⅠ位点及位点间距离。 (3)所有的人类基因组DNA都用SalⅠ酶切,并用来自于克隆1或克隆2的DNA为探针作Southern杂交,结果如下图所示:
其中6个SalⅠ切点的位置可以用以上的结果来确定。请画出这一区域的SalⅠ位点图。